光器用于光片熒光顯微鏡光片熒光顯微鏡的優(yōu)點光片熒光顯微鏡（LSFM）是一種可以對活體標(biāo)本進(jìn)行快速且無光毒性3D觀測的強大顯微成像技術(shù)。LSFM技術(shù)將寬場成像的速度與適度的光學(xué)切片和低光漂白特點相結(jié)合，因此也被稱為選擇性平面照明顯微鏡（SPIM），或簡稱為“光片”。SPIM或LSFM共同的定義特征是從側(cè)面對焦平面進(jìn)行平面照明，在任何給定時間，僅對樣品的一小部分進(jìn)行照明，因此與寬場輻射熒光相比，可以較大限度地減少光損傷并提供改善信噪比的光學(xué)切片。此外由于圖像是以寬場（2D平行）方式收集的，因此光片成像比一次僅檢測一個像素的點掃描共聚焦顯微鏡快得多。由于三個關(guān)鍵特性，光片熒光顯微鏡正成為體積成像較流 ...

的干擾，常規(guī)熒光顯微鏡無法獲得層析圖像。三維結(jié)構(gòu)光照明顯微鏡提高分辨率、獲得層析圖像的原理，就是利用特定結(jié)構(gòu)的照明光來獲得樣品的高頻信息，采用特定算法在橫向和縱向上擴展樣品頻域信息的同時彌補凹陷帶來的影響。飽和結(jié)構(gòu)照明顯微鏡(SSIM)的原理法國OXXIUS多波長合束激光器應(yīng)用在Nikon顯微鏡受激發(fā)射損耗顯微（STED）在STED顯微術(shù)中，有效熒光發(fā)光面積的減小是通過受激發(fā)射效應(yīng)來實現(xiàn)的。一個典型的STED顯微系統(tǒng)中需要兩束照明光，其中一束為激發(fā)光，另外一束為損耗光。當(dāng)激發(fā)光的照射使得其衍射斑范圍內(nèi)的熒光分子被激發(fā)，其中的 電子躍遷到激發(fā)態(tài)后，損耗光使得部分處于激發(fā)光斑外圍的電子以受激發(fā)射的 ...

pe）要介紹熒光顯微鏡，我們需要先簡單介紹一下熒光原理：在光的照射下，具有熒光特性的物質(zhì)的電子在吸收能量后，可由低能級電子層躍遷到高能級電子層。高能態(tài)的電子是不穩(wěn)定的，它會在極短的時間內(nèi)（10-8s），以輻射光的形式釋放能量后，回到原來的能態(tài)。這時發(fā)出的光即為熒光（fluorescence），其波長比激發(fā)光的波長要長，原理如圖2-6所示。利用物質(zhì)對光吸收的高度選擇性，可制成各種濾片，吸收一定波長范圍的光或允許特定波長的光通過，用來激發(fā)不同的熒光素，產(chǎn)生不同顏色的熒光。對于熒光的激發(fā)波長一般都在紫外和可見波段，而對于熒光的發(fā)射波段一般都在可見光波段觀察熒光一般都采用落射熒光觀察方式，就是激發(fā)光是 ...

大腦圖像。在熒光顯微鏡中，當(dāng)兩個獨立的光子被一種介質(zhì)同時吸收時，就會發(fā)生雙光子激發(fā)。這需要兩個合適能量的光子在這樣的介質(zhì)上時間和空間上同時重合；通常來說這不需要非常大的激發(fā)光子通量，當(dāng)然光子通量越大， 雙光子同時被吸收的概率就越大。在TPEF顯微鏡中，更高的光子通量會帶來更高的效率，從而帶來圖像質(zhì)量和分辨率的提升。在TPEF顯微鏡中，雙光子激發(fā)所需的大光子通量更多的是通過寬波段可調(diào)諧的鈦寶石飛秒激光器實現(xiàn)的，激光器典型規(guī)格脈寬為100fs，重復(fù)頻率約為80MHz，這可以給雙光子顯微鏡帶來非常高的峰值功率和大光子通量。然而，激光器較高的平均功率（在1~4瓦范圍內(nèi)）會由于激發(fā)波長的線性吸收引起的與 ...

術(shù)中，雙光子熒光顯微鏡(two-photon fluorescence microscopy, 2PFM)是對大腦這樣的不透明組織進(jìn)行成像的z流行技術(shù)，其微小的雙光子吸收截面將熒光產(chǎn)生限制在顯微鏡物鏡的聚焦體積內(nèi)。為了對樣品中的單個光學(xué)截面進(jìn)行成像，2PFM在二維掃描激發(fā)焦點并記錄每個位置的熒光信號，衍射極限焦點提供z亮的熒光信號以及z高的空間分辨率。然而，只有通過自適應(yīng)光學(xué)(adaptive optics, AO)才能維持在體深度的高空間分辨率，自適應(yīng)光學(xué)可以測量和校正成像光穿過光異質(zhì)樣品時在波前積累的光學(xué)像差。AO與2PFM相結(jié)合，將校正的相位模式應(yīng)用于物鏡后瞳平面(back pupil ...

像以及明場和熒光顯微鏡。幾十年來，解決顯微圖像重建和增強的逆問題一直是研究的熱門話題。先前方法的一個關(guān)鍵組成部分是建立成像系統(tǒng)的前向模型。基于深度學(xué)習(xí)的數(shù)據(jù)驅(qū)動方法為解決光學(xué)顯微鏡中的逆問題提供了另一種途徑。經(jīng)過訓(xùn)練后，DNN可以提供一個非常快速的框架來執(zhí)行圖像重建和增強任務(wù)，而無需任何迭代、參數(shù)調(diào)整或物理前向模型。深度學(xué)習(xí)在光學(xué)顯微鏡中的應(yīng)用包括明場顯微鏡、無透鏡顯微鏡、熒光顯微鏡、超分辨率顯微鏡、共聚焦顯微鏡, 結(jié)構(gòu)照明顯微鏡等。在顯微鏡中也有深度學(xué)習(xí)的新興應(yīng)用，根據(jù)我們目前對光-物質(zhì)相互作用的理解，不可能建立準(zhǔn)確的正向模型。這方面的一個例子是跨模態(tài)圖像轉(zhuǎn)換，其中 DNN使用來自兩種不同成 ...

NIR-II熒光顯微鏡z大的成像深度(超過 900 μm，潛在的白質(zhì)可能成為進(jìn)一步可視化的障礙，圖像細(xì)節(jié)開始變得稀疏)。(5) 離峰NIR-II 熒光成像(即使用發(fā)射尾端而不是峰值區(qū)域)適合使用1400 nm長通 (NIR-IIx + NIR-IIb) 波段。利用IDSe-IC2F，其結(jié)構(gòu)及合成示意見圖8a,b。它的吸收譜見圖8c，發(fā)射譜見圖8d。在這里選用長波通熒光成像，IDSe-IC2F的長波通發(fā)射熒光光譜(900-1700nm,1000-1700nm,1100-1700nm,1200-1700nm,1300-1700nm,1400-1700nm,1500-1700nm)積分強度見圖8e。 ...

肌圖像由光片熒光顯微鏡獲得。視頻顯示了紅細(xì)胞如何流過跳動的心肌。比例尺，50 μm。參考文獻(xiàn)：Wang, Z., Zhu, L., Zhang, H. et al. Real-time volumetric reconstruction of biological dynamics with light-field microscopy and deep learning. Nat Methods 18, 551–556 (2021).DOI：https://doi.org/10.1038/s41592-021-01058-x關(guān)于昊量光電：上海昊量光電設(shè)備有限公司是國內(nèi)知名光電產(chǎn)品專業(yè)代理商， ...

不同于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡，其中激發(fā)波長短于發(fā)射波長，因為兩個激發(fā)光子的波長長于所得發(fā)射光的波長。雙光子激發(fā)顯微通常使用近紅外（1064nm）激發(fā)光，可以激發(fā)熒光染料。使用近紅外的好處是可z大限度地減少組織中的散射。由于多光子吸收，同時能夠減小背景噪聲。這兩種效果都會導(dǎo)致這些顯微鏡的穿透深度增加。基于熒光指示劑的鈣成像提供了一種監(jiān)測動作電位的光學(xué)方法，并被系統(tǒng)的用于補充微電極記錄，測量體內(nèi)的神經(jīng)元活動。這種方法為重建小型模式生物體整個大腦中的神經(jīng)元群的活動開辟了道路。鈣成像技術(shù)結(jié)合雙光子顯微鏡使得在體內(nèi)測量深層神經(jīng)元群體的活動成為可能。隨著熒光顯微鏡技術(shù)的迅速發(fā)展，純相位液晶空間光調(diào)制器在體鈣成像 ...

制出超分辨率熒光顯微鏡”，從此人們對點擴散函數(shù) (PSF) 工程的認(rèn)識有了顯著提高。Moerner 展示了 PSF 工程與 Meadowlark Optics SLM 的使用案例，用于熒光發(fā)射器的超分辨率成像和 3D 定位。 PSF工程已被證明使顯微鏡能夠使用多種成像模式對樣本進(jìn)行成像，同時以非機械方式在模式之間變化。這允許對具有弱折射率的結(jié)構(gòu)進(jìn)行成像，以及對相位結(jié)構(gòu)進(jìn)行定量測量。 已證明的成像方式包括：螺旋相位成像、暗場成像、相位對比成像、微分干涉對比成像和擴展景深成像。美國Meadowlark Optics 公司專注于模擬尋址純相位空間光調(diào)制器的設(shè) 計、開發(fā)和制造，有40多年的歷史，該公司 ...