級只有在顯微物鏡的焦平面才可以達到，因而將可以觀測的信號限制在了焦平面。這帶來的一個好處是，焦平面上下的光損傷會大大減小。飛秒激光有足夠高的峰值功率，并維持一個低的平均功率水平，可以減小生物樣品的光損傷。產生雙光子激發熒光和二次諧波生成等非線性過程信號的強度正比于激光的強度DOI：https://doi.org/10.1038/nphoton.an.2010.2本文章經光學前沿授權轉載,商業轉載請聯系獲得授權。關于昊量光電：上海昊量光電設備有限公司是目前國內知名光電產品專業代理商，也是近年來發展迅速的光電產品代理企業。除了擁有一批專業技術銷售工程師之外，還有擁有一支強大技術支持隊伍。我們的技術 ...

因而需要購買物鏡加熱器等多個設備以實現穩定的熱平衡狀態以及減小對成像分辨率的影響，為實驗帶來諸多不便。基于以上問題，Interherence公司推出了用于超分辨顯微鏡中精確控制樣品溫度的VAHEAT顯微溫度控制器，VAHEAT顯微溫度控制器可實現對溫度的精準控制并對超分辨率成像不產生影響。除此之外，與傳統的溫度加熱儀器相比，VAHEAT顯微溫度控制器具有結構緊湊、與各類顯微鏡兼容、多種加熱模式的優良特性。VAHEAT顯微溫度控制器有兩種智能基板，基底是玻璃制成的，帶有儲液器的凹槽是由與生物細胞具有相容性的硅樹脂制成的，符合大多數細胞的培養。圖 1：VAHEAT顯微溫度控制器無需進一步修改即可安 ...

遮斷。顯微鏡物鏡的 NA同樣的考慮也適用于顯微鏡物鏡。這樣的物鏡設計用于在特定的工作距離下運作，并且根據它應用的顯微鏡類型，可以設計用于在有限距離或無限遠處產生像。在任一情況下，數值孔徑定義所基于的張角均取自預計物面的中心。它通常受物側（即入光處）的光學孔徑限制。在許多情況下，光輸入來自空氣，其折射率接近 1。因此數值孔徑必然小于 1，但對于某些顯微鏡物鏡，它至少不會低很多，例如 0.9。其他具有特別高圖像分辨率的顯微鏡物鏡設計用于在物體和入瞳之間使用一些浸油。由于其較高的折射率（通常略高于 1.5），因此數值孔徑可以大于 1（例如，1.3）。顯微鏡物鏡的 NA 非常重要，特別是在以下方面：它 ...

束反射到顯微物鏡中，阻斷瑞利散射，并將拉曼信號傳輸到光譜儀中，長通濾光片是測量斯托克斯分量的常用濾光片。但是隨著入射角度的增大，邊緣截止波長會出現藍移，且隨著入射角的增加，s和p偏振的邊緣移動量不一致，使得他們不適合于共振拉曼譜測量。如下圖1a所示，入射角增大到30°時邊緣藍移約20 nm，且s偏振和p偏振表現出了7 nm的分裂，說明不適用于可調諧激發。圖1b所示的TLP濾光片可在0-60°范圍內偏轉并不降低邊緣陡度，且在全量程范圍內提供OD>6的光密度和90%以上的傳輸，可調諧波長可覆蓋400-1100 nm，很適合于可調諧激光光源拉曼測試。圖1如下圖2a所示，一個超連續激光光源（40 ...

接照射到相機物鏡上的光線，又會反彈到樣品上。這將再次引起不必要的反射光。2)直接照射光往往比透射光強，在整個系統中帶來比較簡單的雜散光，這會影響樣品的傳輸信號。為了避免任何多余的雜散光，specim建議在透射窗口或具有樣品形狀的線上使用掩膜，避免不必要的直射光通過系統。3.白校正對于任意一個成功的透射式光譜測量，白參考也起著很重要的作用，需要特別注意歸一化。白參考在高光譜成像中是至關重要的，無論是哪種測量幾何學(反射式、吸收和透射式)。它測量進入到相機的入射光(在到達樣品前)(考慮到探測器的量子效率和光學的傳輸性能)。對于經典的反射式測量，通常使用漫反射白板。然而，相同的漫反射白板不能用于透射 ...

儀器中的投影物鏡、工具顯微鏡以及航空測量用的攝影物鏡等，畸變就成為主要的缺陷了。它直接影響測量精度，必須嚴格校正。計量儀器中的物鏡，畸變要求小于萬分之幾，但視場較小，矛盾并不突出;而航空測量用物鏡視場大達 120 度，畸變要求小到十萬分之幾,校正就相當困難，導致鏡頭結構極度復雜。值得指出,結構完全對稱的光學系統以-1倍的倍率成像時，畸變能自然消除。這是因為實際放大率β’可寫成不管Up為何值，由于系統的結構對稱于孔徑光闌,B’恒等于-1而不會產生畸變。對于單個薄透鏡或薄透鏡組，當光闌與之重合時，主光線通過主點，沿理想方向射出,與高斯像面的交點接近與理想像高相等，也不產生畸變，如下圖（a）所示。以 ...

限制在顯微鏡物鏡的聚焦體積內。為了對樣品中的單個光學截面進行成像，2PFM在二維掃描激發焦點并記錄每個位置的熒光信號，衍射極限焦點提供z亮的熒光信號以及z高的空間分辨率。然而，只有通過自適應光學(adaptive optics, AO)才能維持在體深度的高空間分辨率，自適應光學可以測量和校正成像光穿過光異質樣品時在波前積累的光學像差。AO與2PFM相結合，將校正的相位模式應用于物鏡后瞳平面(back pupil plane)的激發波前，可以實現衍射極限性能，并且可以在大腦表面以下數百微米處解析突觸。大腦的在體成像也需要高時間分辨率，對于大腦內的功能成像，需要亞秒級的時間分辨率來跟上神經元活動的 ...

/秒。（1）物鏡采取平面-曲面的成像策略，設計全新的顯微物鏡成像光路，實現物鏡將物方大視場的平面與像方的凹形中間像面對應，從而極大的減小幾何像差(特別是場曲)。（2）采集單元鏡頭采取曲面-平面的成像策略，受昆蟲復眼的啟發，凹形中間像面被分成35個小視場，并被35個中繼鏡頭組(采集單元)重新成像到平面sCMOS上，sCMOS水冷處理至10℃，保持低噪聲水平。原理解析：（1）降低幾何像差，放大中間像面。當視場和數值孔徑變大時，場曲和其它幾何像差會迅速增加。獲得均勻分辨率的大的平面像需要極度復雜的光學設計，實現起來很困難。采用曲面像面設計策略，可以極大的減小如場曲這樣的幾何像差。如圖1a，設計一個1 ...

的脈沖——在物鏡的焦點上的，以確保很好的分辨率和高效率非線性光子產生。在活體樣品成像的情況下，脈沖強度的定量指標也是必要的，以保持樣品的活性。低效率的脈沖形狀會導致不希望的光漂白。本節中，我們將介紹光電二極管中干涉式雙光子吸收自相關 (TPAA) 的方法以及用于一階、二階和三階色散的自相關測量的示例。干涉測量自相關方法的優勢在于它們易于實現并且適用于優化大多數多光子成像應用的激發效率。然而，就其無法提取實際脈沖形狀和相位而言，使得它們從根本上受到限制，因此，通常假設高斯或雙曲正割 (sech) 整形函數。針對這種情況，已經開發出一系列與顯微鏡非常匹配的更復雜的脈沖測量技術；即頻率分辨光開關 ( ...

，一個10x物鏡將激光聚焦到樣本上并收集背向散射光。然后90/10分束器將90%的瑞利散射反射回激光器，同時傳輸所有拉曼位移信號。(與寬帶50/50分束器相比，幾乎提高4倍拉曼信號)。兩個超窄帶VHG陷波器，每個光密度為>4.0，然后在傳輸拉曼信號時進一步衰減收集到的瑞利散射光，估計系統傳輸效率為>80%。濾波后的信號聚焦在25μm芯徑、0.1NA階變折射率光纖上，連接到高分辨率、高通量的單級光譜儀成像光譜儀。它配備了1200線/毫米光柵和1340x400成像陣列，20 × 20 μm像素大小和98%的峰值量子效率，以確保最大的信號采集和1.25波數分辨率;適合5-200波數頻率范 ...